在中国农业科学院兽医研究所期间,开始了自己的独立实验,在本实验室第一个完成了大肠杆菌缺失株的构建。饲养过SPF级的鸡,并进行了疫苗的免疫,以及后续疫苗的评价。多次进行蛋白的表达,纯化,多抗的制备以及相关蛋白功能的验证。精通载体构建,细胞培养,western blot,荧光染色,RNA提取,Real-time PCR。经常进行鸭的LD50毒力试验,以及脏器细菌分离等。在实验室期间经常学习本实验室其他同学的试验,了解单抗的制备,流式细胞术,细菌疫苗的研制及评价,二维电泳,细胞因子检测,cDNA文库的构建,蛋白互作,酵母双杂交等技术。此外,在实验室期间还主管试剂的订购和接收,经常与各种公司的销售员技术员交流。三年时间给自己积累了丰富的实验技术和人际交往经验。
毕业结束联合培养
1.禽致病性大肠杆菌AI-2的检测及其因素分析
利用哈维弧菌BB170 对APEC 是否产生信号分子AI-2进行检测。
本研究利用哈维弧菌BB170检测不同生长时期和不同培养条件下APEC的AI-2活性。同时利用Real-time PCR检测APEC不同生长时期和不同培养条件下luxS和pfs的转录水平。
2. 禽致病性大肠杆菌AI-2的合成及其对生物被膜的影响
通过对APEC的luxS和pfs基因的克隆、表达和纯化,成功获得了可用于AI-2体外合成的可溶性重组蛋白LuxS和Pfs。
利用纯化后的LuxS、Pfs与S-腺苷同型半胱氨酸同时体外催化作用后,成功获得信号分子AI-2。
本研究采用改良结晶紫半定量法和荧光染色法检测AI-2对APEC生物被膜形成能力的影响。
3.禽致病性大肠杆菌luxS缺失株的构建及致病性分析
为进一步研究该系统对APEC的调控作用,本研究构建了APEC的luxS的缺失株。对野生株和缺失株的AI-2活性,运动性,细胞的黏附和入侵性,毒力基因的转录水平,动物的致病性进行了检测。